TY  - THES
T1  - Entwicklung eines humanisierten Mausmodells für X-chromosomale Retinitis Pigmentosa, hervorgerufen durch eine Punktmutation im Rpgr Gen
A1  - Schlegel,Jutta
Y1  - 2012/01/10
N2  - Mutationen im Gen des Retinitis Pigmentosa GTPase Regulators (RPGR)
stellen die häufigste Ursache für X-chromosomale Retinitis Pigmenotsa (RP)
dar. Die meisten der verantwortlichen Mutationen treten in einer spezifischen
repetitiven Region des terminalen Exons ORF15 auf, die deshalb
als mutation hot spot bezeichnet wird. Punktmutationen im ORF15 verursachen
Leserasterverschiebungen, die zu einer veränderten C-terminalen
Aminosäure-Kette mit möglichen toxischen Effekten führen. In dieser Arbeit
wurde ein Mausmodell entwickelt, bei dem die Deletion eines Basenpaares
zu einer Aminosäureveränderung führt, die der des menschlichen
mutierten Proteins gleicht.
Die pathologische Mutation und weitere stille Mutationen wurden mittels
homologer Rekombination eines Vektorkonstrukts in murine ES Zellen eingeführt.
Die Genotypisierung der ES Zellen und später der Tiere wurde
mittels PCR, RT-PCR, Restriktionsverdau und Sequenzierung durchgeführt.
Für histologische Untersuchungen wurden Paraffin- sowie Semidünnschnitte
und elektronen-mikroskopische Aufnahmen angefertigt.
Der Targeting-Vektor wurde in C57/BL6-129sv hybrid ES Zellen eingeführt
und die positiven Klone in Blastozysten implantiert. Die Chimären wurden
genotypisiert und in einen BL/6J Hintergrund zurückgekreuzt. Histologische
Untersuchungen der Retinae deuten auf eine fortschreitende Reduktion
der Retinadicke hin, außerdem finden sich delokalisierte Nuclei in der
Schicht der Inneren Segmente und eine Auflösung der Membrana Limitans
Externa. Ab einem Alter von 6 Wochen sind umfassende morphologische
Veränderungen der Photorezeptorzellen zu beobachten.
Das neu erzeugte Mausmodell bildet einen degenerativen Phänotyp aus,
was auf die Aktivierung eines ähnlichen oder verwandten pathologischen
Verlaufs, verglichen mit dem beim Menschen, hindeutet. Dieses Model wird
zukünftig Einblicke in die pathologischen Mechanismen gewähren, die an
der retinalen Degeneration beteiligt sind, ebenso wie in die biochemischen
Gründe für die Toxizität der veränderten Proteine. Es soll jedoch zukünftig
auch als Therapiemodell dienen, weshalb eine Erkennungssequenz für die
Homingendonuklease I-SceI integriert wurde, um eine spätere Sequenzreparatur
mittels homologer Rekombination an den Chromosomen der Photorezeptoren
durchführen zu können.

CY  - Gießen
PB  - Universitätsbibliothek
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UR  - http://geb.uni-giessen.de/geb/volltexte/2012/8565
ER  -